蛋白濃度測定方法
來源: http://www.lovemassage.cn 類別:實用技術 更新時間:2015-03-18 閱讀次
蛋白濃度測定方法
微量凱氏定氮法:由于蛋白質中存在著含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸,因此蛋白質溶液在280nm處具有紫外吸收高峰。在一定濃度范圍內,蛋白質溶液在此波長處的吸光度與其濃度呈正比關系,因此利用這一性質可進行蛋白質定量測定。微量凱氏定氮法迅速、簡便、不消耗樣品、低濃度鹽類不干擾測定,可測定0.1~1.0mg/mL的蛋白質溶液。
樣品與濃硫酸共熱,含氮有機物即分解產生氨(消化),氨又與硫酸作用,變成硫酸氨。經強堿堿化使之分解放出氨,借蒸汽將氨蒸至酸液中,根據此酸液被中和的程度可計算得樣品之氮含量。若以甘氨酸為例,其反應式如下:
CH2COOH
| + 3H2SO4 ? 2CO2 + 3SO2 +4H2O +NH3 (1)
NH2
2NH3 + H2SO4 ? (NH4)2SO4 (2)
(NH4)2SO4 + 2NaOH ? 2H2O +Na2SO4 + 2NH3 (3)
反應(1)、(2)在凱氏瓶內完成,反應(3)在凱氏蒸餾裝置中進行。
為了加速消化,可以加入CuSO4作催化劑,K2SO4以提高溶液的沸點。收集氨可用硼酸溶液,滴定則用強酸。計算所得結果為樣品總氮量,如欲求得 樣品中蛋白含量,應將總氮量減去非蛋白氮即得。如欲進一步求得樣品中蛋白質的含量,即用樣品中蛋白氮乘以6.25即得。中國糧油儀器在線 http://www.lovemassage.cn
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